说到科研工作者,无论是研究***的致病原理,还是研发其针对性的抗******,都离不开***的分离纯化等制备工作,从而进一步开展研究。下面咱就来看看简便、快捷的***纯化常见步骤。
1、破碎细胞以释放***
被******的细胞通常可用反复冻融的方法进行破碎,也可选择匀浆、超声破碎、酶解等方法。众所周知,核酸容易粘附在***颗粒表面,引起颗粒大小或带电特性的改变,从而导致***得率的降低。因此,需要加适量核酸酶去除宿主核酸,这一点容易被忽略却非常关键。
对于将***直接分泌到细胞外的分泌型系统或样品,可选择省略这一步,直接离心收集上清液进行后续操作。
2、过滤以达到澄清
上一步得到的上清液中含有细胞碎片及其他大颗粒聚集物,可以通过膜过滤的方式去除这些杂质达到澄清的目的。在使用膜过滤方法时,需要注意选择对***颗粒吸附较少的膜材质,孔径一般选择0.45μm。
3、纯化***
如果***的后续应用过程中,残留的宿主蛋白、核酸及其他杂质的存在会造成影响,则需要进一步纯化***,去除上述杂质。常见的纯化方法有离子交换或凝胶过滤。如果对***外壳蛋白及其静电特性比较清楚,可选择离子交换法,其优点是操作简易、特异性好。但若纯化的新型***或宿主杂质与***具有相似的静电特性,可选择凝胶过滤,其操作条件温和,回收率高,但操作费时、处理量小。如果对杂质含量要求不是很严苛的应用,可直接用超滤法浓缩纯化***,具体操作见第四步。
4、浓缩***
纯化后的***溶液往往需要进一步浓缩和换液,以达到后续应用的要求。超滤法操作条件温和、操作简便、快速,可同时进行浓缩和换液。默克可提供一系列离心式或搅拌式超滤装置,配合不同的膜面积、不同的截留分子量的切向流系统。
小体积样本(0.5~15mL),只需普通离心机(例如德国NACHT纳赫特离心机NACHTC-15R,文末附产品参数)即可,并且可有效浓缩的同时保证高回收率。
对于中等体积样本(15-70mL),可以选择性能较高的离心机进行浓缩和换液,同样具有操作简便,回收率高等特点。
5过滤除菌
若后续***的应用过程中,要求***样品为无菌,则还需对制备的***样品做进一步过滤除菌。
德国NACHT通用台式冷冻离心机 C-15R产品特点:
1.通用台式冷冻离心机,内置制冷系统;
2.静止状态下也可控制转子温度;
3.采用环保无氟制冷剂;
4.环境温度+23℃时,比较高转速下,转子比较低温度约+5℃,13000rpm下约为0℃。
技术参数:
NACHT C-15R |
|
比较大转速 |
15300/5500 r/min |
比较大相对离心力 |
23031 xg |
比较大容量 |
6×85 mL /4×200 mL |
相当小转速 |
200 r/min |
功率 |
550 W |
数码显示 |
LCD显示屏 |
电机 |
免维护无碳刷变频电机 |
温度范围 |
-20℃~+40℃ |
快速冷却 |
比较大转速下小于4℃ |
制冷剂 |
环保制冷,不含氯氟烃 |
开盖方式 |
电动锁定机盖,自动开盖 |
转子 |
角转子和水平转子 |
时间控制 |
10 s ~ 99 h |
尺寸(长宽高) |
675×410×375 mm |
重量 |
64 Kg |
噪音 |
53~59 dB |
可配容量为1.5~85 mL的角转子,1.5~200 mL的水平转子及酶标板转子。
德国NACHT(纳赫特)为杰懋万得福旗下品牌,目前主要定位于试验离心机的研发与生产,实验室离心机为其主打成品,种类多样,型号齐全,包括实验室小型离心机、通用离心机以及大容量落地离心机等,广泛应用于工业、生物、化学、制药、材料、食品饮料和电子等行业。
NACHT(纳赫特)离心机均采用德国制造技术,精益求精,打造性能稳定,运行平稳,故障率低的离心机,经久耐用。与此同时,依靠其不断的技术创新,在离心力、转速等技术上取得不错的成绩,目前已和多家高校、科研院所、****、检验机构进行深度合作。
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